發(fā)布時(shí)間：2026-03-27
摘要
目的：酒精性肝病（ALD）是肝細(xì)胞癌的病因之一，并伴隨腸道滲漏和微生物群變化。葛根對(duì)肝損傷具有保護(hù)作用。本研究旨在探討葛根治療ALD的機(jī)制。采用超高效液相色譜-四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（UPLC-Q/TOF-MS）分析葛根提取物（PUE）的成分。
方法：通過(guò)建立急性和慢性ALD模型，評(píng)估PUE的抗酒精和保肝效果。結(jié)果顯示，PUE治療降低了血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、總膽固醇（TC）和甘油三酯（TG）的水平以及炎癥因子水平，減輕了肝臟炎癥和醉酒狀態(tài)。PUE通過(guò)下調(diào)乙醇脫氫酶1（ADH1）的基因表達(dá)和血清乙醛（ACH）水平，抑制了乙醇代謝生成ACH，同時(shí)上調(diào)乙醛脫氫酶2（ALDH2）的基因水平以加速ACH分解，從而減輕肝臟炎癥和腸道屏障損傷。同時(shí)，16S rDNA測(cè)序顯示，PUE改變了微生物群組成，減少了變形菌門和脫硫桿菌門的豐度，從而抑制了脂多糖（LPS）的生成及其下游Toll樣受體4（TLR4）/髓樣分化因子88（MyD88）/核因子κB（NF-κB）通路。PUE還增加了擬桿菌屬、瘤胃球菌屬和普雷沃氏菌屬的豐度，并產(chǎn)生短鏈脂肪酸（SCFAs）以保護(hù)腸壁。
結(jié)論：糞便微生物群移植（FMT）治療進(jìn)一步證實(shí)，PUE以腸道微生物群依賴的方式緩解ALD。因此，PUE通過(guò)調(diào)節(jié)腸道微生物群和抑制乙醇代謝，經(jīng)由肝-腸-腦軸緩解ALD，未來(lái)具有良好的應(yīng)用前景。
關(guān)鍵詞：
酒精性肝病，腸道微生物群，野葛根，脂多糖，肝-腸-腦軸
核心內(nèi)容
酒精性肝病（ALD）主要由長(zhǎng)期或過(guò)量飲酒引起，可從酒精性肝炎、脂肪肝發(fā)展為肝纖維化、肝硬化甚至肝細(xì)胞癌。肝-腸-腦軸參與了ALD的形成。酒精在肝臟中代謝為乙醛（ACH），增加腸道通透性，破壞腸道菌群，使脂多糖（LPS）從腸腔轉(zhuǎn)移至循環(huán)系統(tǒng)。隨后，LPS與肝臟中的Toll樣受體4（TLR4）結(jié)合，激活MyD88/NF-κB通路，上調(diào)促炎細(xì)胞因子水平，進(jìn)一步加劇肝臟氧化損傷。同時(shí)，炎癥因子和LPS通過(guò)迷走神經(jīng)和血腦屏障進(jìn)入大腦，引起神經(jīng)炎癥，導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)遲緩、肢體無(wú)力及翻正反射喪失。葛根是一種藥食同源植物，富含黃酮類、三萜類和多糖，對(duì)腦、肝、心和生殖系統(tǒng)有保護(hù)作用。目前，葛根治療肝損傷的研究多集中于非酒精性肝病，對(duì)ALD的研究較少，且多集中于異黃酮和多糖等單體。由于肝-腸-腦軸的存在以及酒精對(duì)腸道和肝臟的共同損傷，葛根治療ALD的機(jī)制尚不明確，有待充分闡明。
研究流程示例
葛根提取物（PUE）制備： 新鮮葛根用80%乙醇浸泡過(guò)夜，80℃提取2小時(shí)，上清液真空旋蒸干燥，得到PUE。
成分分析：
采用紫外-可見(jiàn)分光光度法（UV-Vis）測(cè)定PUE中總黃酮、總多糖、總多酚、總皂苷和總蛋白的含量。
采用高效凝膠滲透色譜（HPGPC）結(jié)合示差折光檢測(cè)器（RID）分析多糖的分子量分布。
采用UPLC-Q/TOF-MS對(duì)PUE中的化合物進(jìn)行定性分析。
采用高效液相色譜（HPLC）對(duì)四種典型異黃酮（葛根素、大豆苷、染料木苷和芒柄花素）進(jìn)行定量分析。
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：
急性ALD模型： 小鼠連續(xù)3天灌胃PUE（低、高劑量）或生理鹽水，末次給藥30分鐘后灌胃酒精，隨后進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試（翻正反射、曠場(chǎng)、爬桿、平衡木）并檢測(cè)血清ALT/AST水平。
慢性ALD模型： 小鼠連續(xù)4周每天灌胃PUE或生理鹽水，30分鐘后灌胃酒精。收集血液、肝臟、回腸及內(nèi)容物，進(jìn)行生化指標(biāo)檢測(cè)、組織病理學(xué)分析、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、實(shí)時(shí)定量PCR（RT-PCR）、Western Blot和16S rDNA測(cè)序。
糞便微生物群移植（FMT）： 受體小鼠經(jīng)抗生素處理清除腸道菌群后，分別接受模型組或PUE處理組小鼠的糞便懸液灌胃，同時(shí)給予酒精，以驗(yàn)證腸道菌群在PUE治療ALD中的作用。
行為學(xué)測(cè)試： 包括翻正反射喪失（LORR）、平衡木實(shí)驗(yàn)、爬桿實(shí)驗(yàn)、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、機(jī)械痛閾測(cè)試和跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)。
其他檢測(cè)： 包括血清生化指標(biāo)（ALT、AST、TC、TG）、炎癥因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）和LPS水平、血漿乙醛含量、肝臟和結(jié)腸組織病理學(xué)（H&E染色）、腸道緊密連接蛋白（ZO-1、occludin）表達(dá)、糞便中SCFAs含量測(cè)定以及肝臟轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和RT-PCR驗(yàn)證。
討論與總結(jié)
本研究證實(shí)，葛根提取物（PUE）通過(guò)調(diào)節(jié)肝-腸-腦軸，對(duì)酒精性肝病具有顯著的治療效果。其機(jī)制主要包括兩個(gè)方面：
調(diào)節(jié)酒精代謝： PUE通過(guò)抑制ADH1活性，減少酒精向乙醛的轉(zhuǎn)化，同時(shí)激活A(yù)LDH2，加速乙醛分解，從而降低體內(nèi)乙醛蓄積，減輕其對(duì)肝臟和腸道的直接毒性。
調(diào)節(jié)腸道菌群： PUE富集了產(chǎn)SCFAs的有益菌（如擬桿菌屬、瘤胃球菌屬、普雷沃氏菌屬），增加SCFAs水平，從而修復(fù)腸道屏障功能，減少LPS滲漏。LPS進(jìn)入肝臟后，通過(guò)TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)通路引發(fā)的炎癥反應(yīng)也隨之被抑制。
此外，PUE還降低了血清炎癥因子水平，減輕了由炎癥信號(hào)通過(guò)腸-腦軸傳遞引起的神經(jīng)炎癥和行為異常。
未來(lái)研究
1. 活性成分精準(zhǔn)解析
分離鑒定PUE中起關(guān)鍵作用的多糖（2.05 kDa）與異黃酮類成分，探究其協(xié)同作用機(jī)制，明確“成分-靶點(diǎn)-菌群”的對(duì)應(yīng)關(guān)系。
2. 肝-腸-腦軸關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)驗(yàn)證
利用基因敲除、神經(jīng)阻斷等技術(shù)，驗(yàn)證TLR4/MyD88/NF-κB通路及迷走神經(jīng)在PUE治療中的核心地位，明確SCFAs作為信號(hào)分子的作用。
3. 腸道菌群功能驗(yàn)證
采用無(wú)菌動(dòng)物模型與單一菌定植技術(shù)，直接驗(yàn)證關(guān)鍵菌屬（如擬桿菌屬、瘤胃球菌屬）在PUE緩解ALD中的必要性。
4. 臨床轉(zhuǎn)化探索
開(kāi)展小樣本臨床試驗(yàn)，評(píng)估葛根提取物在ALD患者中的有效性與安全性，開(kāi)發(fā)具有輔助保肝、解酒功能的標(biāo)準(zhǔn)化產(chǎn)品。
5. 長(zhǎng)期安全性評(píng)價(jià)
系統(tǒng)評(píng)估PUE長(zhǎng)期使用的安全性及其對(duì)藥物代謝酶的影響，為臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
文獻(xiàn)推薦
IF5.7
Pueraria Extract Ameliorates Alcoholic Liver Disease via the Liver–Gut–Brain Axis: Focus on Restoring the Intestinal Barrier and Inhibiting Alcohol Metabolism
1.YP-Ab-13947/YP-mAb-13947anti-MyD88 antibody
2.anti-NF-κB antibody
3.YP-mAb-18349anti-ZO-1 antibody
